茜素紅染色是一種常用的染色方法，以下是關(guān)于它的詳細(xì)介紹：

原理

茜素紅（Alizarin Red S）是一種蒽醌衍生物，能與碳酸鈣或磷酸鈣中的鈣鹽螯合形成橙紅色復(fù)合物，從而用于體外檢測(cè)組織切片或者培養(yǎng)細(xì)胞的鈣質(zhì)變化

操作步驟

以干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)茜素紅染色為例：

吸去培養(yǎng)基并洗滌：在成骨誘導(dǎo)分化結(jié)束后，吸去六孔板中的成骨誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基，用 1×PBS 輕柔洗滌 2-3 次，去除培養(yǎng)基中的成分，為后續(xù)的固定和染色做準(zhǔn)備。

固定：每孔加入 2mL 4% 多聚甲醛溶液（或 10% 福爾馬林），室溫固定 30min，以保持細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)。

洗滌：吸去固定液，用 1×PBS 輕柔洗滌 2-3 次，確保將固定液清洗徹底，避免對(duì)后續(xù)染色結(jié)果產(chǎn)生干擾。

染色：每孔加入 2mL 茜素紅工作液，室溫染色 5-10min，具體染色時(shí)間需根據(jù)鏡下可見的聚集鈣結(jié)節(jié)情況來確定，不能僅以誘導(dǎo)時(shí)間決定。

洗滌：吸去茜素紅染色液，用 1×PBS 輕柔洗滌 2-3 次，充分洗去多余染色液，以獲得清晰的染色結(jié)果。

觀察：每孔加入 2mL 1×PBS，將培養(yǎng)板置于顯微鏡下觀察成骨染色效果，評(píng)估成骨組織的形態(tài)和鈣化區(qū)域的分布。

封裝和保存：染色后的六孔板用封口膜封裝，置于 4℃可保存 2 周，保持染色結(jié)果的穩(wěn)定性和樣本的完整性。

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