以下是關(guān)于阿利新藍(lán)染色的詳細(xì)介紹：

基本原理

阿利新藍(lán)是一種陽(yáng)離子染料，分子結(jié)構(gòu)中的異硫脲基具有中度堿性，使得染料帶陽(yáng)離子。組織內(nèi)的酸性粘液物質(zhì)含有陰離子基團(tuán)，如羧基和硫酸根，阿利新藍(lán)可與這些陰離子基團(tuán)形成不溶性復(fù)合物，從而使酸性粘液物質(zhì)染成藍(lán)色。通過(guò)調(diào)整染液的 pH 值，可以區(qū)分不同類型的酸性粘液物質(zhì)，如在 pH2.5 時(shí)，組織內(nèi)的羧基電離，與阿利新藍(lán)中的陽(yáng)離子形成鹽鍵，使帶有羧基的組織（如蛋白多糖、透明質(zhì)酸以及上皮酸性黏蛋白）染色；在 pH1.0 時(shí)，組織內(nèi)的硫酸根電離，與阿利新藍(lán)中的陽(yáng)離子形成鹽鍵，使帶有硫酸根的組織（如硫酸黏液物質(zhì)）染色。

操作步驟

以石蠟切片為例，阿利新藍(lán)染色的一般步驟如下：

樣品固定：將組織樣品固定在 10% 中性緩沖甲醛中，通常固定時(shí)間為 12-24 小時(shí)，固定后用蒸餾水清洗樣品以去除固定劑。

組織切片：將固定好的組織依次經(jīng)梯度乙醇脫水（70%、80%、90%、95%、100% 乙醇，分別 5 分鐘），然后進(jìn)行二甲苯透明處理，接著將組織包埋在石蠟中，用切片機(jī)將石蠟包埋的組織切成 4-6 微米厚的切片，并將切片鋪展在載玻片上。

脫蠟和再水化：石蠟切片用二甲苯處理兩次，每次 5 分鐘，以去除石蠟，再將切片依次放入 100%、95%、80%、70% 的乙醇中，每步 3 分鐘，使其再水化，最后用蒸餾水沖洗。

阿利新藍(lán)染色：將載玻片或細(xì)胞樣品放入預(yù)先制備的 1% 阿利新藍(lán)染色液中，染色時(shí)間通常為 30 分鐘至 1 小時(shí)，染色后用蒸餾水輕輕漂洗樣品 3 次，每次 2 分鐘，以去除未結(jié)合的染料。

酸性清洗（可選）：為了去除非特異性染色，可以使用 0.1N 鹽酸溶液進(jìn)行快速清洗，通常數(shù)秒，隨后立即用蒸餾水沖洗。

脫水：將染色后的切片依次放入 70%、80%、95%、100% 的乙醇中，每步 2 分鐘，進(jìn)行脫水，隨后用二甲苯處理兩次，每次 2 分鐘，以透明樣品。

封片：用適量封片劑封閉切片，蓋上蓋玻片，避免氣泡產(chǎn)生。

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