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β - 半乳糖苷酶染色是一種用于檢測細胞內 β - 半乳糖苷酶活性的技術,以下是其相關介紹:
β - 半乳糖苷酶能將無色的 5 - 溴 - 4 - 氯 - 3 - 吲哚 - β - D - 半乳糖苷(X - Gal)分解成藍色產(chǎn)物。在細胞內,如果存在 β - 半乳糖苷酶,它會作用于 X - Gal,使其產(chǎn)生藍色沉淀,從而可以通過顯微鏡觀察到細胞被染成藍色,以此來判斷細胞是否表達 β - 半乳糖苷酶以及該酶的活性情況。
細胞固定:將培養(yǎng)的細胞用適當?shù)墓潭ㄒ海ㄈ?4% 多聚甲醛)固定一段時間,通常為 15 - 30 分鐘,以保持細胞的形態(tài)和酶的活性。
洗滌:用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌細胞,去除固定液和細胞表面的雜質,一般洗滌 3 次,每次 5 - 10 分鐘。
染色:加入含有 X - Gal 的染色工作液,將細胞置于 37℃孵育一段時間,通常為 12 - 24 小時,具體時間根據(jù)細胞類型和 β - 半乳糖苷酶的表達水平而定。在孵育過程中,β - 半乳糖苷酶會將 X - Gal 分解產(chǎn)生藍色產(chǎn)物。
終止反應:當觀察到細胞出現(xiàn)明顯的藍色染色時,用 PBS 洗滌細胞,終止染色反應。
觀察與分析:通過光學顯微鏡觀察染色后的細胞,統(tǒng)計藍色細胞的數(shù)量或分析藍色染色的強度,以評估 β - 半乳糖苷酶的活性和表達情況。
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